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本文標(biāo)題:"糖元混合液沉淀化石樣品分析圖像顯微鏡廠家"

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糖元混合液沉淀化石樣品分析圖像顯微鏡廠家

 
   上清液再用等體積的酚、氯仿、異戊醇(體積比為25:24:”抽提一次
,抽提過程中要翻轉(zhuǎn)試管幾次以混勻液體。值得注意的是,熱的提取溶液
會導(dǎo)致有機溶液蒸發(fā)而增加試管內(nèi)的壓力,并導(dǎo)致試管沖開。然后在常溫
下10000g離心5分鐘以分離水相和有機相,將水相轉(zhuǎn)移到一個新的試管內(nèi)。
在大多數(shù)情況下,水相會在上層,但是在鹽存在的情況下,分層會顛倒。
因此研究者需要分清水相和有機相后,再棄去有機廢液。可加幾滴酚到可
疑的有機相中,如果酚進入溶液中,證明是有機相,如果分離則是水相。
再用等體積的氯仿、異戊醇(體積比為24:])抽提一次,翻轉(zhuǎn)試管幾次,離
心,轉(zhuǎn)移上清液到新的試管內(nèi)。在沉淀過程中,可加不含DNA的糖元(1訓(xùn)1m
g/m,溶液)作為DNA的載體。加一倍體積的異丙醇,翻轉(zhuǎn)混勻,于—20~(2
過夜,以沉淀DNA。DNA/糖元混合液在室溫下10000g離心30分鐘,去掉上
清液,沉淀用]m,70%的乙醇洗兩次后,離心,去掉上清液。這一步操作
要特別注意,因為沉淀有可能沒有沉在管壁,而在沖洗的過程中被丟棄。
沉淀經(jīng)過真空干燥(5分鐘),或者在空氣中自然干燥,然后溶于100山的]/
10XTE緩沖液中(1 mMTrisHCI,0.0]mMEDTA,pH8.0)。
    沉淀可能由于含有褐色雜質(zhì)而呈深色,這不足為怪;要注意的是,當(dāng)
用瓊脂糖電泳來觀察DNA片段大小時,在紫外光下不想要的共沉淀物會發(fā)出
藍(lán)色熒光。因為這些化合物可能會影響酶的擴增,因此許多抽提后的純化
方法可以去掉這些雜質(zhì)。含有雜質(zhì)的DNA溶液可以通過硅膠樹脂柱(Qiagen)
或者與樹脂漿混合(PromegaWizard純化系統(tǒng)或者Bio101 Gene純化系統(tǒng)),
而將雜質(zhì)從樹脂柱上洗掉,或者在溶液當(dāng)中就被移走。通過改變洗脫液而
將DNA再次釋放出來。
 

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