本文標(biāo)題："多聚酶濃度一般為0．5-5單位之間-材料顯微鏡"
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多聚酶濃度一般為0．5-5單位之間-材料顯微鏡
嚴(yán)格確定引物退火溫度，一般為50-60℃。較高溫度會(huì)增強(qiáng)引物與
模板的正確識(shí)別和結(jié)合，同時(shí)能降低引物3’端不正確核苷酸的錯(cuò)誤延
伸。但溫度不能過(guò)高，過(guò)高溫度會(huì)破壞引物與模板結(jié)合。
延伸溫度通常約72cC。
(二)多聚酶濃度：一般為0．5-5單位之間。酶量少，合成產(chǎn)物量較
低，酶量高，會(huì)造成非特異性產(chǎn)物量增加。
(三)鎂離子：PCR擴(kuò)增過(guò)程中鎂離子濃度應(yīng)保持在0．5-2．5mmol／
L之間。鎂離子濃度可影響引物退火、模板和PCR產(chǎn)物的解離、產(chǎn)物特異
性、引物二聚體生成和酶活性等。
(四)平臺(tái)效應(yīng)：平臺(tái)效應(yīng)是指PER循環(huán)后期，合成產(chǎn)物到達(dá)0．3～1
pmol水平時(shí)，由于產(chǎn)物的堆積，使原來(lái)以指數(shù)增加的擴(kuò)增速度變緩慢。
導(dǎo)致平臺(tái)效應(yīng)因素包括：dNTP或引物等不斷消耗，反應(yīng)物(帥或酶)的穩(wěn)
定性，最終產(chǎn)物(焦磷酸鹽，雙鏈DNA)的阻化作用，非特異性結(jié)合和引
物二聚體參與競(jìng)爭(zhēng)。
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